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    基因研究,我該拿你怎么辦?

    發(fā)布時間: 2021-09-01  點擊次數(shù): 1259次

    有時候小伙伴們拿到一個 Gene-A,可能是芯片篩查的結(jié)果,可能是導(dǎo)師拍腦袋的結(jié)果,這個 A 很低調(diào),被人研究的頗少,作為一個基礎(chǔ)研究的新手,簡直一頭霧水!

    凡是都有規(guī)律可循。如果你文獻(xiàn)看的沒有那么多,腦洞未開,下面的保守方法可以適合你進(jìn)行初步的嘗試。但是要提醒小伙伴們不時的追蹤一下文獻(xiàn)研究進(jìn)展,更多的時候不是為了知道某個分子或者某個領(lǐng)域研究的最新情況,這些對于基層科研人員的意義并不是很大;而是為了發(fā)散自己的思維,提煉別人的研究設(shè)計思路!


    下面這幾步,對于剛剛上手實驗的小伙伴來說,應(yīng)該有所幫助。

    1.確定 A 研究的價值,即臨床組織樣本/相關(guān)細(xì)胞系中有沒有差異性表達(dá)

    腫瘤組織樣本
    分析A在臨床組織中的表達(dá)是否與腫瘤進(jìn)展程度或者例如大小、轉(zhuǎn)移灶、預(yù)后等相關(guān)


    腫瘤細(xì)胞系分析A在臨床癌組織、腫瘤細(xì)胞系中的表達(dá)對比癌旁組織和正常細(xì)胞系是否差異表達(dá)


    2. 確定 A 能夠?qū)δ骋患?xì)胞表型產(chǎn)生一定的影響

    shRNA慢病毒干擾載體







    敲除/過表達(dá)A






    細(xì)胞增殖
    過表達(dá)載體細(xì)胞凋亡
    突變載體細(xì)胞周期
    敲除載體細(xì)胞運(yùn)動

    細(xì)胞侵襲


    3. 確定 A 能夠?qū)π∈蟮哪[瘤形成的作用是否與上一步較為一致。

    選擇動物模型進(jìn)行功能驗證,一般選擇裸鼠進(jìn)行成瘤實驗

    裸鼠種植瘤需注意:

    ●腫瘤細(xì)胞的狀態(tài)

    ●細(xì)胞的數(shù)量:每只注射2×106-107

    ●裸鼠的選擇:5-8周齡

    ●種植部位:血供豐富區(qū)域,如腋窩中后部、腹股溝中上部。


    4. 找出 A 的作用機(jī)制

    Microarray/pathway array/相關(guān)芯片分析A影響下游基因的mRNA/通路/蛋白表達(dá)變化


    qRT-PRC、Western blot 驗證


    驗證A調(diào)控B/C/D的特異性

    結(jié)合增殖、周期、凋亡、遷移和侵襲等表型

    另外還可以同步研究一下 A 本身是否受到甲基化或者乙酰化等表觀遺傳調(diào)控。


    這樣是否簡單易懂呢?小伙伴們不妨針對自己的某基因研究,做出一個類似的技術(shù)路線圖,做完一步劃掉一步。那些表型也不是都做的,要看文獻(xiàn)或者自己分析一下你研究的基因 A 是否跟一些例如增殖相關(guān)基因或者周期相關(guān)基因等有聯(lián)系,或者涉及到某些明星通路等。

    以上為常規(guī)手段,可為基礎(chǔ)薄弱的小伙伴尋求大方向。如果想要高大上的研究設(shè)計,每步還請自行查閱文獻(xiàn)加以創(chuàng)新。

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