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端粒顯示實驗
發(fā)布時間： 2022-12-01 點擊次數(shù)： 941次簡介
端粒（telomere）是真核細胞染色體末端的 DNA 重復(fù)序列，它與多種端粒結(jié)合蛋白結(jié)合在一起，發(fā)揮重要的生物學(xué)功能，在細胞分裂的過程中，盡管端粒也會不斷的縮短，但可以通過端粒酶的催化，以自身 RNA 為模板進行補充，從而代償了這一損失。
端粒的功能保護染色體末端完整性，穩(wěn)定染色體，保障染色體 DNA 在復(fù)制的過程中不被縮短，保護染色體結(jié)構(gòu)基因，防止基因組 DNA 降解、防止染色體末端融合，調(diào)節(jié)細胞生長、衰老等作用。
目前，用于端粒顯示實驗的方法主要有 3 種：Southern印跡法、Q-FISH法和qPCR法。
原理
Southern印跡法檢測端粒長度的基本原理是盡管不同物種的端粒的重復(fù)序列可存在差異，在同一種生物體內(nèi)為特定序列，如人端粒是由 6 個堿基重復(fù)序列（TTAGGG）和結(jié)合蛋白組成。通過與放射性同位素 32P 標(biāo)記的探針 32P-（TTAGGG）n，檢測末端限制性片段（terminal restriction fragments，TRF）的長度分布情況，并計算出端粒長度的平均值。Q-FISH法檢測端粒形態(tài)及長度的基本原理是盡管不同物種的端粒的重復(fù)序列可存在差異，但在同一種生物體內(nèi)為特定序列，如人端粒是由 6 個堿基重復(fù)序列（TTAGGG）和結(jié)合蛋白組成。因此，對于端粒長度的檢測，傳統(tǒng)上可以對上述重復(fù)序列設(shè)計探針，采用核酸分子雜交技術(shù)進行測量。QPCR法檢測端粒長度的基本原理是盡管不同物種的端粒的重復(fù)序列可存在差異，但在同一種生物體內(nèi)為特定序列，如人端粒是由 6 個堿基重復(fù)序列（TTAGGG）和結(jié)合蛋白組成。因此，對于端粒長度的檢測，傳統(tǒng)上可以對上述重復(fù)序列設(shè)計探針，采用核酸分子雜交技術(shù)進行測量。基于一個細胞中端粒長度的均值與端粒-單拷貝基因比率（Telomere-to-Single Copy Gene ratio，T/S 比率）有關(guān)的證據(jù)，通過測量和計算出 T/S 比率，從而測量出端粒的長度。
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