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葉綠體被膜完整性的測定

發(fā)布時間： 2023-01-16　　點擊次數(shù)： 1209次

原理
由于玻璃氰-化-鉀不能透過被膜，故完整葉綠體在等滲介質(zhì)中不能進行玻璃氰-化-鉀光還原的Hill反應。而失去完整被膜的葉綠體，鐵氰-化-鉀可以進入類囊體進行Hill反應。根據(jù)這一原理，比較脹破與未脹破的葉綠體Hill反應速率，就可計算葉綠體被膜的完整度。
材料與儀器
植物材料
鐵氰-化-鉀 NH4Cl
氧電極測氧全套裝置燒杯微量進樣器洗耳球
步驟
1. 取0.1ml葉綠體提取液加到0.9ml的蒸餾水中并攪拌1min，使葉綠體被膜脹破，加1ml測定介質(zhì)Ⅰ懸浮備用。

2. 取0.1ml未脹破葉綠體提取液加入反應杯中，視反應杯體積加入測定介質(zhì)Ⅱ，加入適量鐵氰-化-鉀和NH4Cl，使鐵氰-化-鉀和NH4Cl的最終濃度都為1mmol/L。攪拌，平衡1min，照光測定Hill反應放氧速率，記錄5min，然后清洗反應杯。

3. 將已脹破葉綠體加入反應杯中，再加入適量測定介質(zhì)Ⅱ、鐵氰-化-鉀和NH4Cl，使反應體系物質(zhì)最終濃度同未脹破葉綠體測定體系，測定過程同2。

4. 分別計算脹破和未脹破的葉綠體測定體系中單位時間的放氧量（或Hill反應速率）。

5. 計算被膜完整度。
注意事項
1. 本實驗所用玻璃要存放在冰箱中，存放時間不宜過長，最好現(xiàn)配現(xiàn)用。

2. 葉綠體的分離要在0~4℃下進行，玻璃器皿和溶液都須預冷，操作要快，整個分離過程最好在5min內(nèi)完成。

3. 離心過程中離心機的轉(zhuǎn)速不宜過高，否則葉綠體中的淀粉粒會打破葉綠體被膜。

4. 被膜完整度的測定過程中，反應杯內(nèi)破碎葉綠體與完整葉綠體的葉綠素含量應相等。
常見問題
葉綠體的外膜和內(nèi)膜合稱為被膜。葉綠體的外膜和內(nèi)膜都是連續(xù)的單位膜, 每層膜的厚度為6～8nm, 內(nèi)外兩膜間有10～20nm寬的間隙, 稱為膜間隙。與線粒體不同的是，葉綠體的內(nèi)膜并不向內(nèi)折成嵴, 但在某些植物中，內(nèi)膜可皺折形成相互連接的泡狀或管狀結(jié)構(gòu)，稱為周質(zhì)網(wǎng)(peripheral reticulum)，這種結(jié)構(gòu)的形成可增加內(nèi)膜的表面積。

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